1.
罗湖病毒(TiLV)RT-qPCR方法的建立
徐淑菲 朱黄鑫 曾韵颖 刘启霖 方成俊 林双庆 孔凡德
渔业研究
2022, 44 (2):
154-161.
DOI: 10.14012/j.cnki.fjsc.2022.02.006
研究根据罗湖病毒(Tilapia lake virus,TiLV)编码RNA聚合酶的基因片段1设计1对特异性引物和探针,建立一种检测TiLV的实时荧光定量RT-PCR(RT-qPCR)方法,并对该检测方法进行了反应体系和条件优化。结果表明,优化的20 μL反应体系: 2×Probe RT-PCR Master Mix 10 μL,QN Probe RT-Mix 0.2 μL,5 μmol/L的引物TiLV-qF、TiLV-qR、探针TiLV-qP各1 μL,模板1 μL,补充RNase-free water至20 μL。优化的反应条件:反转录45℃ 20 min;预变性95℃ 5 min;扩增95℃ 15 s,60℃ 1 min,40个循环。荧光收集设置在60℃退火延伸时进行。本文建立的RT-qPCR方法检测TiLV的特异性好,重复性好,灵敏度高,灵敏度为2.5×10
-8 ng/μL,可为TiLV的监测和预防提供技术支撑。
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